"I Informações sobre o exame:
Este exame consiste na análise de metilação do DNA em 9 sítios CpGs localizados na região promotora do gene MLH1, seguida de interpretação dos dados por equipe especializada. O teste pode ajudar na distinção entre síndrome hereditária e doença esporádica de câncer colorretal e de endometrio. O exame pode ser realizado em material obtido a partir de tecidos (blocos de parafina ou lâminas histológicas).

II Critérios de realização:
Para a realização deste exame é necessária solicitação médica.
É imprescindível que seja fornecida cópia do laudo anatomopatológico original da análise do material.

Poderão ser aceitos os seguintes materiais:
Fragmentos de tecido fixados em formalina 10% tamponada, embebidos ou não em parafina (enviar em temperatura ambiente);
Lâminas de corte histológico (enviar em temperatura ambiente)
Caso sejam enviadas somente lâminas para a análise, são necessárias no mínimo 10 (dez) lâminas em branco (não coradas), não montadas; seção de 5µm de espessura, em portalâminas.
ATENÇÃO: Não serão aceitas lâminas com resina ou material fora das condições citadas acima.
O tecido deve ter sido fixado previamente em formalina tamponada o mais rápido possível após a biópsia ou cirurgia. A fixação deve ser de, no mínimo, seis horas e, no máximo, 48 horas. A adoção de cuidados na coleta e na fixação da amostra garantem o sucesso do teste.
Caso seja enviado fragmento de tecido sem análise prévia (biópsia), o material deverá ser submetido a exame anatomopatológico para confirmação do diagnóstico naquela amostra.
É necessário que a amostra tenha células tumorais não necróticas presentes em quantidade superior a 30%.
É importante salientar que o material enviado sempre será analisado por um médico patologista antes da realização do exame. Dessa forma, se o material enviado for insuficiente ou inadequado para o teste, o mesmo não poderá ser realizado. O teste pode ter resultado limitado/comprometido em amostras submetidas a descalcificação prévia ou com material escasso."

"TECIDO:
Enviar o material (lâminas, material fresco ou blocos de parafina) à Seção de Anatomia patológica junto com cópia do laudo anatomopatológico original (quando o material não tiver sido analisado no Fleury) em temperatura ambiente

Estabilidade da amostra:
Temperatura ambiente: indeterminado
Refrigerada (2-8 ºC): não aceitável.
Congelada (-20 ºC): não aceitável."

Sequenciamento de nova geração (NGS) para análise de metilação de 9 sítios CpGs (chr3:37034753-37034840, GRCh37) localizados na região promotora do gene MLH1 (NG_007109). O teste se inicia com a conversão do DNA com bissulfito de sódio seguida de amplificação da região de interesse. O produto da amplificação é utilizado para preparo de biblioteca de amplicon e submetido ao sequenciamento em plataforma Illumina. A porcentagem de metilação da região promotora é obtida com auxílio do software CLC Genomics Workbench.

"Ausência de metilação.

"

"O resultado do teste pode ser classificado em:
- ""Ausência de metilação "" - quando a média dos valores de metilação dos 9 CpGs analisados está abaixo de 5%.

- ""Presença de metilação "" - quando a média dos valores de metilação dos 9 CpGs analisados está a partir de 5%.

"